凝胶过滤色谱法

  凝胶过滤层析又称凝胶排阻色谱, 分子筛色谱法, 凝胶过滤法等。运用凝胶过滤介质为固定相，根据物猜中溶质相对分子质量的差异的液相色谱法。只根据尺度巨细别离，大组分最早被洗提出。色谱固定相是多孔性凝胶，只要直径小于孔径的组分能进入凝胶孔道。大组分不能进入凝胶孔洞而被排阻，只能沿着凝胶粒子之间的空地经过，因而最大的组分最早被洗提出来。小组分可进入大部分凝胶孔洞，在色谱柱中停留时间长，会更慢被洗提出来。溶剂分子因体积最小，可进入一切凝胶孔洞，因而是最终从色谱柱中洗提出。这也是与其他色谱法最大的不同。

  5.纯化过程中不需要能引起蛋白变性的有机溶剂1.分辨率较低，需选用细长柱

  (4) 凝胶粒径凝胶颗粒一般为球形，其粒径巨细对别离度有重要影响（粒径越小，其别离功率越高）。100-200目(50-150μm)

  (6) 空地体积(Void volume) 表明填充柱中凝胶粒子周围的总空间即V0(用平均分子量为2000kDa蓝色葡聚糖测出) 。

  吸附色谱固定相通常是活性硅胶、氧化铝、活性炭、聚乙烯、聚酰胺等固体吸附剂，所以吸附色谱也称液固吸附色谱。活性硅胶最常用。

  （1）脱盐及缓冲液的替换：因为蛋白质与盐的分子量相差较大，因而，很简单经过凝胶过滤色谱将二者分隔；了替换缓冲液，可将平衡缓冲液和洗脱缓冲液运用需替换的缓冲液，这样，脱盐的一起即可将样品缓冲液进行替换。

  （2）分级别离：当方针蛋白大于凝胶的排阻极限，而杂质处于排阻范围内时，简单得到较纯的意图蛋白；但事实上，因为凝胶的孔径具有必定的散布，要想将方针蛋白和杂蛋白彻底分隔，具有必定的难度

  （3）分子量的测定：在凝胶过滤介质的分级范围内蛋白质的分配系数（或洗脱体积）与相对分子质量的对数呈线性关系（KD=a-blgMW），所以，凝胶过滤色谱可用于不知道物质相对分子质量的测定。